同一樣本可以多次做原位雜交實驗嗎?
一般情況下,如果操作沒有得到理想的結(jié)果,是可以將探針洗滌然后進行再次的雜交的。如果使用的是直標(biāo)型探針,還可以使用不同探針對同一樣本進行反復(fù)雜交。針對不同的樣本,處理方法略有不同。
原位雜交實操中哪些因素比較重要?
重要的因素:溫度、光照、濕度和試劑的PH值。溫度和濕度直接影響著探針和目標(biāo)DNA的雜交效率;光照影響著熒光染料的強度,所以探針要避光保存,其已經(jīng)雜交的片子可用防熒光淬火劑封片且避光保存;各種試劑pH也要達到要求,這也直接關(guān)系到原位雜交的穩(wěn)定性。
核酸原位雜交可根據(jù)其檢測物而分為細胞內(nèi)原位雜交和組織切片內(nèi)原位雜交;根據(jù)其所用探針及所要檢測核酸的不同又可分為DNA-DNA, RNA-DNA, RNA-RNA雜交。但不論哪種雜交都必須經(jīng)過組織細胞的固定,預(yù)雜交,雜交,沖等一系列洗步驟及自顯影或酶法顯色以顯示雜交結(jié)果。
我們在這兒介紹的是整胚原位雜交,不同于一般的在載片上對細胞和組織切片進行探針雜交及檢測的原位雜交,
以上信息由專業(yè)從事原位雜交檢測的貝科新肽于2025/4/8 21:10:06發(fā)布
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