熒光原位雜交在線咨詢 武漢貝科新肽

熒光原位雜交在線咨詢 武漢貝科新肽[貝科新肽]內(nèi)容：

以菌落原位雜交為例：對分散在若干個瓊脂平板上的少數(shù)菌落（100-200）進(jìn)行篩選時，可采用該方法。將這些菌落歸并到一個瓊脂主平板以及已置于第二個瓊脂平板表面的一張纖維素濾膜上。經(jīng)培養(yǎng)一段時間后，對菌落進(jìn)行原位裂解。主平板應(yīng)貯存于4℃直至得到篩選結(jié)果。

將少數(shù)菌落轉(zhuǎn)移到纖維素濾膜上

（1） 在含有選擇性的瓊脂平板上放一張纖維素濾膜。

（2） 用無菌牙簽將各個菌落先轉(zhuǎn)移至濾膜上，再轉(zhuǎn)移至含有選擇性但未放濾膜的瓊脂主平板上。應(yīng)按一定的格子進(jìn)行劃線接種（或打點(diǎn)）。每菌落應(yīng)分別劃線于兩個平板的相同位置上。后，在濾膜和主平板上同時劃一個含有非重組質(zhì)粒的菌落。

（3） 倒置平板，于37℃培養(yǎng)至劃線的細(xì)菌菌落生長到0.5-1.0mm的寬度。

（4） 用已裝防水黑色繪圖墨水的針頭穿透濾膜直至瓊脂，在3個以上的不對稱位置作標(biāo)記。在主平板大致相同的位置上也作上標(biāo)記。

（5） 用Parafilm膜封好主平板，倒置貯放于4℃，直至獲得雜交反應(yīng)的結(jié)果。

（6） 裂解細(xì)菌，按本段下面所述方法，使釋放的DNA結(jié)合于纖維素濾膜。

原位雜交技術(shù)是在一定的溫度和離子濃度下，使具有特異序列的單鏈探針通過堿基互補(bǔ)規(guī)則與組織細(xì)胞內(nèi)待測的核酸復(fù)性結(jié)合而使得組織細(xì)胞中的特異性核酸得到定位，并通過探針上所標(biāo)記的檢測系統(tǒng)將其在核酸的原有位置上顯示出來。經(jīng)特定標(biāo)記的核苷酸鏈為探針，可與組織切片、細(xì)胞或染色體標(biāo)本中的待檢DNA片段或mRNA進(jìn)行雜交，然后顯示標(biāo)記物，從而分析待檢核酸的分布和含量。利用此項(xiàng)技術(shù)可研究各種基因在染色體上的定位，編碼某種蛋白質(zhì)的mRNA在胞質(zhì)中的表達(dá)。

而是對完整的斑馬魚胚胎進(jìn)行探針雜交及檢測，從整體上把握探針的結(jié)合部位，然后對胚胎進(jìn)行切片，以確定探針結(jié)合的具體位置。整胚原位雜交在斑馬魚分子生物學(xué)研究中是一種非常重要的實(shí)驗(yàn)方法，原位雜交的探針可以是同位素的探針，用自顯影來檢測；也可以是非同位素的探針，通過熒光或酶法予以檢測。我們這兒所介紹的一種原位雜交的方法是通過后者，以標(biāo)記探針，然后用酶聯(lián)的方法進(jìn)行檢測。

原位雜交技術(shù)還在以下生物領(lǐng)域有應(yīng)用：

細(xì)胞化學(xué)和學(xué)：原位雜交技術(shù)可以用于研究細(xì)胞內(nèi)特定化學(xué)物質(zhì)的定位和分布，例如檢測細(xì)胞內(nèi)酶、、神經(jīng)遞質(zhì)等物質(zhì)的分布和定位。此外，還可以應(yīng)用于學(xué)研究，例如檢測細(xì)胞、分子的分布和定位等。

神經(jīng)科學(xué)：在神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域，原位雜交技術(shù)常被用于研究神經(jīng)元的生長、發(fā)育和連接等過程。例如，通過標(biāo)記特定基因的探針，可以檢測神經(jīng)元中特定基因的表達(dá)和定位，進(jìn)而研究其在神經(jīng)信號傳遞、神經(jīng)環(huán)路形成等方面的作用。

以上信息由專業(yè)從事熒光原位雜交的貝科新肽于2025/4/6 18:32:10發(fā)布

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