原理簡(jiǎn)介
GFP、RFP等熒光蛋白因其的熒光性質(zhì)和靈敏性，常作為報(bào)告基因研究并分析基因產(chǎn)物在細(xì)胞中的定位和相互作用等。將目標(biāo)蛋白與熒光蛋白的N端或者C端融合，通過(guò)瞬時(shí)轉(zhuǎn)化技術(shù)或穩(wěn)定遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)，使得該融合蛋白在受體材料細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，目標(biāo)蛋白會(huì)牽引熒光蛋白一起定位到目標(biāo)細(xì)胞器，通過(guò)顯微鏡觀察熒光蛋白在細(xì)胞內(nèi)顯示的位置，確定目標(biāo)蛋白的位置，從而確定目標(biāo)蛋白的亞細(xì)胞定位情況。
GFP是綠色熒光蛋白，在掃描共聚焦顯微鏡的激光照射下會(huì)發(fā)出綠色熒光，從而可以地定位蛋白質(zhì)的位置。綠色螢光蛋白（GFP）是一個(gè)由約238個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，從藍(lán)光到紫外線都能使其激發(fā)，發(fā)出綠色熒光。通過(guò)基因工程技術(shù)，綠色螢光蛋白(GFP)基因能轉(zhuǎn)進(jìn)不同物種的基因組，在后代中持續(xù)表達(dá)，并且能根據(jù)啟動(dòng)子特異性地表達(dá)。
使用GFP必須構(gòu)建融合蛋白載體，并在轉(zhuǎn)染之后有效表達(dá)。這樣，若在熒光顯微鏡下看到細(xì)胞內(nèi)某一部位存在GFP信號(hào)，說(shuō)明和GFP融合的蛋白也存在于該部位，這樣就達(dá)到了確定某物質(zhì)亞細(xì)胞定位的目的。
亞細(xì)胞定位是指在細(xì)胞內(nèi)定位蛋白質(zhì)、基因或其它分子元件的過(guò)程。通過(guò)亞細(xì)胞定位，可以了解這些物質(zhì)在細(xì)胞中的具體位置、作用和相互關(guān)系。在植物細(xì)胞中，亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)包括細(xì)胞核、線粒體、葉綠體、質(zhì)膜、細(xì)胞壁等。通過(guò)對(duì)洋蔥細(xì)胞的亞細(xì)胞定位，可以揭示洋蔥中生物活性物質(zhì)在各個(gè)亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)中的分布情況。
洋蔥的亞細(xì)胞定位通常采用熒光技術(shù)或綠色熒光蛋白標(biāo)記技術(shù)。熒光技術(shù)是一種基于抗原-反應(yīng)的定位技術(shù)，通過(guò)標(biāo)記特異性，將目標(biāo)物質(zhì)與熒光標(biāo)記結(jié)合，從而對(duì)其進(jìn)行定位。綠色熒光蛋白標(biāo)記技術(shù)則是一種將目標(biāo)基因與綠色熒光蛋白基因融合，通過(guò)觀察綠色熒光蛋白的表達(dá)情況來(lái)定位目標(biāo)基因的技術(shù)。
以上信息由專業(yè)從事洋蔥亞細(xì)胞定位的貝科新肽于2025/4/7 23:06:40發(fā)布
轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明來(lái)源：http://www.chevaliers-et-troubadours.com/qyzx/bkxtbio-2853930114.html
