將32 P標(biāo)記的雙鏈DNA探針于100℃加熱5分鐘，迅速置于冰浴中。單鏈探針不必變性。將探針加到雜交袋中雜交過夜。雜交期間，盛濾膜的容器應(yīng)蓋嚴(yán)，以防液體蒸發(fā)。
雜交結(jié)束后，去除雜交液，立即于室溫把濾膜放入大體積（300-500ml）的2×SSC和0.1% SDS溶液中，輕輕振搖5分鐘，并將濾膜至少翻轉(zhuǎn)一次。重復(fù)洗 一次，同時應(yīng)避免膜干涸。
68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次，每次1-1.5小時。此時已可進(jìn)行自顯影。如背景很高或?qū)嶒?yàn)要求嚴(yán)格的洗膜條件，可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃將濾膜浸泡60分鐘。
原位雜交第三天
1） 用1ml含10％熱滅清的MABT溶液置換溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mlMABT置換，25分鐘，再用1mlMABT溶液置換，一小時以上，后用1mlMABT溶液置換，25分鐘。
2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分鐘。
3）將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate(底物，用之前加5mM左旋米唑)，十六孔板外面包上錫箔紙以避光，避免搖動，室溫下顯色。
4）每隔一小時觀察胚胎是否開始顯色
5）將顯色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗兩三次后加上4％多聚甲醛固定，拍照。
6）4C冰箱保存。
原位雜交技術(shù)還在以下生物領(lǐng)域有應(yīng)用：
生態(tài)學(xué)和環(huán)境科學(xué)：在生態(tài)學(xué)和環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域，原位雜交技術(shù)可以用于研究生物與環(huán)境之間的相互作用。例如，通過標(biāo)記特定基因的探針，可以檢測環(huán)境中微生物種群的分布和變化，進(jìn)而研究其對環(huán)境的影響和作用。
進(jìn)化生物學(xué)：在進(jìn)化生物學(xué)領(lǐng)域，原位雜交技術(shù)可以用于研究物種之間的遺傳差異和進(jìn)化關(guān)系。例如，通過比較不同物種之間基因序列的差異，可以揭示物種之間的親緣關(guān)系和進(jìn)化歷程。
以上信息由專業(yè)從事原位雜交檢測的貝科新肽于2025/4/2 21:05:15發(fā)布
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