湖北染色體原位雜交服務(wù)至上「貝科新肽」

湖北染色體原位雜交服務(wù)至上「貝科新肽」[貝科新肽]內(nèi)容：

以菌落原位雜交為例：對分散在若干個瓊脂平板上的少數(shù)菌落（100-200）進(jìn)行篩選時，可采用該方法。將這些菌落歸并到一個瓊脂主平板以及已置于第二個瓊脂平板表面的一張纖維素濾膜上。經(jīng)培養(yǎng)一段時間后，對菌落進(jìn)行原位裂解。主平板應(yīng)貯存于4℃直至得到篩選結(jié)果。

將少數(shù)菌落轉(zhuǎn)移到纖維素濾膜上

（1） 在含有選擇性的瓊脂平板上放一張纖維素濾膜。

（2） 用無菌牙簽將各個菌落先轉(zhuǎn)移至濾膜上，再轉(zhuǎn)移至含有選擇性但未放濾膜的瓊脂主平板上。應(yīng)按一定的格子進(jìn)行劃線接種（或打點(diǎn)）。每菌落應(yīng)分別劃線于兩個平板的相同位置上。后，在濾膜和主平板上同時劃一個含有非重組質(zhì)粒的菌落。

（3） 倒置平板，于37℃培養(yǎng)至劃線的細(xì)菌菌落生長到0.5-1.0mm的寬度。

（4） 用已裝防水黑色繪圖墨水的針頭穿透濾膜直至瓊脂，在3個以上的不對稱位置作標(biāo)記。在主平板大致相同的位置上也作上標(biāo)記。

（5） 用Parafilm膜封好主平板，倒置貯放于4℃，直至獲得雜交反應(yīng)的結(jié)果。

（6） 裂解細(xì)菌，按本段下面所述方法，使釋放的DNA結(jié)合于纖維素濾膜。

多彩色熒光原位雜交技術(shù)多彩色熒光原位雜交(Multicolor fluorescence in situ hybridization，mFISH)是在熒光原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新技術(shù)，它用幾種不同顏色的熒光素單獨(dú)或混合標(biāo)記的探針進(jìn)行原位雜交，能同時檢測多個靶位，各靶位在熒光顯微鏡下和照片上的顏色不同，呈現(xiàn)多種色彩，因而被稱為多彩色熒光原位雜交。它克服了FISH技術(shù)的局限，能同時檢測多個基因，在檢測遺傳物質(zhì)的突變和染色體上基因定位等方面得到了廣泛的應(yīng)用

原位雜交（In situ hybridazation）

固定

收集斑馬魚的胚胎，在Holfretor水中培養(yǎng)，到達(dá)所需要的發(fā)育時期時，用蛋白酶去除卵膜，用4%多聚甲醛固定，在4℃保存，二十四小時后用50%2%多聚甲醛溶液洗，然后換成，在-20C 保存，待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用處理，去除色素?；蛘呤褂帽斤畴逑∪芤号囵B(yǎng)，可阻斷色素的形成)

FISH技術(shù)的基本步驟包括探針制備、樣品預(yù)處理、探針與樣品的雜交、信號檢測和圖像分析等。在探針制備過程中，使用熒光標(biāo)記物代替同位素標(biāo)記物來標(biāo)記探針。在樣品預(yù)處理過程中，細(xì)胞或組織的固定、裂解和去除非特異性蛋白質(zhì)等操作都是必要的，以提高探針與目標(biāo)序列的親和力和特異性。在探針與樣品的雜交過程中，探針與樣品中的目標(biāo)序列進(jìn)行互補(bǔ)性雜交，形成可檢測的熒光信號。在信號檢測和圖像分析過程中，使用高靈敏度熒光顯微鏡檢測熒光信號并獲取高分辨率的細(xì)胞圖像。

以上信息由專業(yè)從事染色體原位雜交的貝科新肽于2025/4/6 19:23:09發(fā)布

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