以菌落原位雜交為例：對(duì)分散在若干個(gè)瓊脂平板上的少數(shù)菌落（100-200）進(jìn)行篩選時(shí)，可采用該方法。將這些菌落歸并到一個(gè)瓊脂主平板以及已置于第二個(gè)瓊脂平板表面的一張纖維素濾膜上。經(jīng)培養(yǎng)一段時(shí)間后，對(duì)菌落進(jìn)行原位裂解。主平板應(yīng)貯存于4℃直至得到篩選結(jié)果。
將少數(shù)菌落轉(zhuǎn)移到纖維素濾膜上
（1） 在含有選擇性的瓊脂平板上放一張纖維素濾膜。
（2） 用無(wú)菌牙簽將各個(gè)菌落先轉(zhuǎn)移至濾膜上，再轉(zhuǎn)移至含有選擇性但未放濾膜的瓊脂主平板上。應(yīng)按一定的格子進(jìn)行劃線接種（或打點(diǎn)）。每菌落應(yīng)分別劃線于兩個(gè)平板的相同位置上。后，在濾膜和主平板上同時(shí)劃一個(gè)含有非重組質(zhì)粒的菌落。
（3） 倒置平板，于37℃培養(yǎng)至劃線的細(xì)菌菌落生長(zhǎng)到0.5-1.0mm的寬度。
（4） 用已裝防水黑色繪圖墨水的針頭穿透濾膜直至瓊脂，在3個(gè)以上的不對(duì)稱位置作標(biāo)記。在主平板大致相同的位置上也作上標(biāo)記。
（5） 用Parafilm膜封好主平板，倒置貯放于4℃，直至獲得雜交反應(yīng)的結(jié)果。
（6） 裂解細(xì)菌，按本段下面所述方法，使釋放的DNA結(jié)合于纖維素濾膜。
原位雜交技術(shù)還在以下生物領(lǐng)域有應(yīng)用：
細(xì)胞化學(xué)和學(xué)：原位雜交技術(shù)可以用于研究細(xì)胞內(nèi)特定化學(xué)物質(zhì)的定位和分布，例如檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)酶、、神經(jīng)遞質(zhì)等物質(zhì)的分布和定位。此外，還可以應(yīng)用于學(xué)研究，例如檢測(cè)細(xì)胞、分子的分布和定位等。
神經(jīng)科學(xué)：在神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域，原位雜交技術(shù)常被用于研究神經(jīng)元的生長(zhǎng)、發(fā)育和連接等過(guò)程。例如，通過(guò)標(biāo)記特定基因的探針，可以檢測(cè)神經(jīng)元中特定基因的表達(dá)和定位，進(jìn)而研究其在神經(jīng)信號(hào)傳遞、神經(jīng)環(huán)路形成等方面的作用。
以上信息由專業(yè)從事動(dòng)物組織原位雜交的貝科新肽于2025/3/15 5:03:33發(fā)布
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