湖北熒光原位雜交服務(wù)周到 貝科新肽科技公司

湖北熒光原位雜交服務(wù)周到 貝科新肽科技公司[貝科新肽]內(nèi)容：這一原理對于檢測一個特異的mRNA在某一種生物體，或者某些組織切片、單個細(xì)胞里具體表達(dá)位置非常有用。該技術(shù)早應(yīng)用于60年代末期，由于核酸分子雜交的特異性高，并可定位，因此該技術(shù)已被廣泛應(yīng)用，例如與細(xì)胞內(nèi)RNA進(jìn)行雜交以觀察該組織細(xì)胞中特定基因表達(dá)水平。原位雜交能在成分復(fù)雜的組織中進(jìn)行單一細(xì)胞的研究而不受同一組織中其他成分的影響，因此對于那些細(xì)胞數(shù)量少且散在于其他組織中的細(xì)胞內(nèi)DNA或RNA研究更為方便；同時由于原位雜交不需要從組織中提取核酸，對于組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性，并可完整地保持組織與細(xì)胞的形態(tài)，更能準(zhǔn)確地反映出組織細(xì)胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài)。

一. 原位雜交天

1. 重新水化和固定

1） 吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分鐘。

2） 置換成30％的PBST溶液，放置5分鐘

3） 置換成PBST溶液，放置5分鐘，重復(fù)一次

4） 置換成4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘

5） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。

 蛋白酶處理與后固定（本實(shí)驗(yàn)不做此步）

1） 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節(jié)以下的胚胎不處理，5體節(jié)到24小時的胚胎處理3分鐘，24小時以上的胚胎處理5分鐘或者更長。發(fā)育時間越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶處理，發(fā)育時間長的胚胎就需要用蛋白酶來疏松組織，以便于雜交。

2） 用PBST溶液輕洗，在PBST中放置5分鐘。

3） 用4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘，室溫。

4） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。

原位雜交第二天

1.

1）將探針回收，放于－20C保存(通常探針可重復(fù)使用十次左右)。

2）加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分鐘，重復(fù)一次。

3）置換2XSSCT1ml，60℃，放置15分鐘。

4）置換0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分鐘，重復(fù)一次。

2.

1）用MABT洗兩次，每次五分鐘，放在搖床輕輕搖動。

2）室溫下加1ml 1：2：7溶液，時間為一小時。

3）按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶連，4C 冰箱過夜。

植物原位雜交的應(yīng)用包括：

研究基因表達(dá)：通過觀察熒光信號的位置和數(shù)量，可以確定目標(biāo)基因在植物組織中的表達(dá)模式和位置。

染色體定位：將目標(biāo)基因與染色體中的特定位置進(jìn)行比較，可以確定目標(biāo)基因在染色體中的位置和分布。

基因：通過原位雜交技術(shù)，可以確定目標(biāo)基因的序列和位置，為基因提供重要的參考信息。

檢測物種或品種特異性：通過原位雜交技術(shù)可以檢測出不同物種或品種之間基因表達(dá)的差異，從而為物種或品種特異性研究提供依據(jù)。

遺傳育種：通過原位雜交技術(shù)可以檢測出不同品種之間基因表達(dá)的差異，從而為遺傳育種提供重要的參考信息。

以上信息由專業(yè)從事熒光原位雜交的貝科新肽于2025/3/18 22:45:43發(fā)布

轉(zhuǎn)載請注明來源：http://www.chevaliers-et-troubadours.com/qyzx/qyxx-2849171312.html

上一條：離子交換柱價格信賴推薦「豐億環(huán)?！?/a>

下一條：離子交換柱價格信賴推薦「豐億環(huán)?！?/a>