以菌落原位雜交為例：對分散在若干個瓊脂平板上的少數(shù)菌落（100-200）進行篩選時，可采用該方法。將這些菌落歸并到一個瓊脂主平板以及已置于第二個瓊脂平板表面的一張纖維素濾膜上。經(jīng)培養(yǎng)一段時間后，對菌落進行原位裂解。主平板應(yīng)貯存于4℃直至得到篩選結(jié)果。
將少數(shù)菌落轉(zhuǎn)移到纖維素濾膜上
（1） 在含有選擇性的瓊脂平板上放一張纖維素濾膜。
（2） 用無菌牙簽將各個菌落先轉(zhuǎn)移至濾膜上，再轉(zhuǎn)移至含有選擇性但未放濾膜的瓊脂主平板上。應(yīng)按一定的格子進行劃線接種（或打點）。每菌落應(yīng)分別劃線于兩個平板的相同位置上。后，在濾膜和主平板上同時劃一個含有非重組質(zhì)粒的菌落。
（3） 倒置平板，于37℃培養(yǎng)至劃線的細菌菌落生長到0.5-1.0mm的寬度。
（4） 用已裝防水黑色繪圖墨水的針頭穿透濾膜直至瓊脂，在3個以上的不對稱位置作標記。在主平板大致相同的位置上也作上標記。
（5） 用Parafilm膜封好主平板，倒置貯放于4℃，直至獲得雜交反應(yīng)的結(jié)果。
（6） 裂解細菌，按本段下面所述方法，使釋放的DNA結(jié)合于纖維素濾膜。
原位雜交（In situ hybridazation）
固定
收集斑馬魚的胚胎，在Holfretor水中培養(yǎng)，到達所需要的發(fā)育時期時，用蛋白酶去除卵膜，用4%多聚甲醛固定，在4℃保存，二十四小時后用50%2%多聚甲醛溶液洗，然后換成，在-20C 保存，待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用處理，去除色素?；蛘呤褂帽斤畴逑∪芤号囵B(yǎng)，可阻斷色素的形成)
原位雜交的基本原理是利用標記的核酸探針與細胞或組織中的DNA或RNA進行雜交，然后通過檢測標記來識別探針的位置。這使得研究人員能夠在細胞或組織中確定特定基因或基因組區(qū)域的位置和表達水平。
原位雜交可以用于多種類型的實驗。例如，它可以用來檢測特定基因在發(fā)育過程中的表達模式，或者確定特定基因變異在細胞中的分布。此外，原位雜交還可以用于診斷疾病，例如某些類型的，以及監(jiān)測效果。
植物組織原位雜交是一種重要的分子生物學(xué)技術(shù)，它可以用來研究植物基因的表達和調(diào)控。該技術(shù)利用DNA探針與目標組織中的RNA或DNA結(jié)合，從而確定目標基因的表達模式和位置。本文將介紹植物組織原位雜交的原理、步驟和應(yīng)用。
原理
植物組織原位雜交的原理是利用DNA探針與目標組織中的RNA或DNA結(jié)合，從而確定目標基因的表達模式和位置。DNA探針是一段已知序列的DNA分子，可以與目標RNA或DNA的互補序列結(jié)合。在組織原位雜交中，DNA探針通常標記有熒光染料或性同位素，以便于檢測。
以上信息由專業(yè)從事染色體原位雜交的貝科新肽于2025/4/3 7:39:03發(fā)布
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